1. Namen: Namen tega postopka je zagotoviti standardiziran postopek za aseptične operacije in zaščito sterilnih prostorov.
2. Področje uporabe: laboratorij za biološko testiranje
3. Odgovorna oseba: Nadzornik QC, preizkuševalec
4. Definicija: Brez
5. Varnostni ukrepi
Strogo izvajajte aseptične postopke, da preprečite mikrobno kontaminacijo; operaterji morajo pred vstopom v sterilni prostor izklopiti UV-svetilko.
6. Postopki
6.1. Sterilna soba mora biti opremljena s sterilno operacijsko sobo in prostorom za shranjevanje. Čistoča sterilne operacijske sobe mora dosegati razred 10000. Notranja temperatura mora biti vzdrževana med 20 in 24 °C, vlažnost pa med 45 in 60 %. Čistoča čiste mize mora dosegati razred 100.
6.2 Sterilni prostor je treba vzdrževati čist, kopičenje odpadkov za preprečevanje kontaminacije pa je strogo prepovedano.
6.3 Strogo preprečite kontaminacijo vse sterilizacijske opreme in gojišča. Tisti, ki so kontaminirani, naj jih prenehajo uporabljati.
6.4. Sterilni prostor mora biti opremljen z razkužili delovne koncentracije, kot so 5 % raztopina krezola, 70 % alkohol, 0,1 % raztopina klormetionina itd.
6.5 Sterilni prostor je treba redno sterilizirati in čistiti z ustreznim razkužilom, da se zagotovi, da čistoča sterilnega prostora ustreza zahtevam.
6.6. Vse instrumente, pripomočke, posodo in druge predmete, ki jih je treba prinesti v sterilni prostor, je treba tesno zaviti in sterilizirati z ustreznimi metodami.
6.7. Pred vstopom v sterilno sobo si mora osebje umiti roke z milom ali razkužilom, nato pa se v prostoru za zaščito pred okužbo preobleči v posebna delovna oblačila, obutev, kape, maske in rokavice (ali si pred vstopom v sterilno sobo ponovno obrisati roke s 70 % etanolom). Operacije izvajati v bakteriološki komori.
6.8. Pred uporabo sterilnega prostora je treba v sterilnem prostoru vklopiti ultravijolično svetilko za obsevanje in sterilizacijo za več kot 30 minut, hkrati pa je treba vklopiti tudi čisto mizo za pihanje zraka. Po končanem postopku je treba sterilni prostor pravočasno očistiti in nato sterilizirati z ultravijolično svetlobo 20 minut.
6.9 Pred pregledom mora biti zunanja embalaža preskusnega vzorca nedotaknjena in se je ne sme odpirati, da se prepreči kontaminacija. Pred pregledom zunanjo površino razkužite z vatiranimi kroglicami s 70 % alkoholom.
6.10 Med vsakim postopkom je treba opraviti negativno kontrolo, da se preveri zanesljivost aseptičnega delovanja.
6.11. Pri sesanju bakterijske tekočine morate uporabiti sesalno kroglico. Slamice se ne dotikajte neposredno z usti.
6.12. Iglo za cepljenje je treba pred in po vsaki uporabi sterilizirati s plamenom. Po ohladitvi se lahko kultura inokulira.
6.13. Slamice, epruvete, petrijevke in druge pripomočke, ki vsebujejo bakterijsko tekočino, je treba za razkuževanje namočiti v sterilizacijskem vedru s 5 % raztopino Lysola ter jih po 24 urah vzeti ven in sprati.
6.14. Če se po mizi ali tleh razlije bakterijska tekočina, morate na onesnaženo območje takoj naliti 5 % raztopino karbolne kisline ali 3 % raztopino Lysol in jo pred obdelavo vsaj 30 minut preliti. Če so delovna oblačila in klobuki onesnaženi z bakterijsko tekočino, jih je treba po sterilizaciji z visokotlačno paro takoj sleči in oprati.
6.15. Vse predmete, ki vsebujejo žive bakterije, je treba pred izpiranjem pod pipo razkužiti. Strogo je prepovedano onesnaževati kanalizacijo.
6.16. Število kolonij v sterilnem prostoru je treba preverjati mesečno. Z odprto čisto mizo vzemite več sterilnih petrijevk z notranjim premerom 90 mm in vanje aseptično vbrizgajte približno 15 ml hranilnega agarja, ki je bil stopljen in ohlajen na približno 45 °C. Po strjevanju ga postavite na glavo pri 30 do 35 °C. Inkubirajte 48 ur v inkubatorju. Po dokazilu sterilnosti vzemite 3 do 5 plošč in jih postavite na levo, sredino in desno od delovnega položaja. Po odprtju pokrova in izpostavitvi 30 minut jih postavite na glavo v inkubator pri 30 do 35 °C za 48 ur in jih vzemite ven. Pregledajte. Povprečno število različnih bakterij na plošči v čistem prostoru razreda 100 ne sme presegati 1 kolonije, povprečno število v čistem prostoru razreda 10000 pa ne sme presegati 3 kolonij. Če je meja presežena, je treba sterilni prostor temeljito razkužiti, dokler ponovljeni pregledi ne izpolnjujejo zahtev.
7. Glejte poglavje (Metoda pregleda sterilnosti) v "Metode pregleda higiene zdravil" in "Kitajske standardne operativne prakse za pregled zdravil".
8. Oddelek za distribucijo: Oddelek za upravljanje kakovosti
Tehnična navodila za čiste sobe:
Ko dobimo sterilno okolje in sterilne materiale, moramo vzdrževati sterilno stanje, da lahko preučujemo določen znani mikroorganizem ali uporabljamo njegove funkcije. V nasprotnem primeru se lahko različni mikroorganizmi od zunaj zlahka pomešajo. Pojav mešanja nepomembnih mikroorganizmov od zunaj se v mikrobiologiji imenuje kontaminirajoče bakterije. Preprečevanje kontaminacije je ključna tehnika pri mikrobiološkem delu. Popolna sterilizacija na eni strani in preprečevanje kontaminacije na drugi strani sta dva vidika aseptične tehnike. Poleg tega moramo preprečiti, da bi preučevane mikroorganizme, zlasti patogene mikroorganizme ali gensko spremenjene mikroorganizme, ki v naravi ne obstajajo, uhajale iz naših poskusnih posod v zunanje okolje. Za te namene obstaja v mikrobiologiji veliko ukrepov.
Sterilna soba je običajno majhna soba, posebej opremljena v mikrobiološkem laboratoriju. Lahko je zgrajena iz rjuh in stekla. Površina ne sme biti prevelika, približno 4-5 kvadratnih metrov, višina pa mora biti približno 2,5 metra. Zunaj sterilne sobe je treba postaviti zaščitni prostor. Vrata zaščitnega prostora in vrata sterilne sobe ne smejo biti obrnjena v isto smer, da se prepreči vnos različnih bakterij s pretokom zraka. Tako sterilna soba kot zaščitni prostor morata biti nepredušno zaprta. Notranja prezračevalna oprema mora imeti naprave za filtriranje zraka. Tla in stene sterilne sobe morajo biti gladke, odporne na umazanijo in enostavne za čiščenje. Delovna površina mora biti ravna. Sterilna soba in zaščitni prostor sta opremljena z ultravijoličnimi lučmi. Ultravijolične luči v sterilni sobi so oddaljene 1 meter od delovne površine. Osebje, ki vstopa v sterilno sobo, mora nositi sterilizirana oblačila in pokrivala.
Trenutno so sterilni prostori večinoma v mikrobioloških tovarnah, medtem ko splošni laboratoriji uporabljajo čiste mize. Glavna funkcija čistih miz je uporaba laminarne naprave za pretok zraka za odstranjevanje različnih drobnih prahov, vključno z mikroorganizmi, z delovne površine. Električna naprava omogoča, da zrak prehaja skozi HEPA filter in nato vstopi v delovno površino, tako da je delovna površina vedno pod nadzorom pretoka sterilnega zraka. Poleg tega je na strani blizu zunanje strani nameščena visokohitrostna zračna zavesa, ki preprečuje vstop zunanjega bakterijskega zraka.
V težkih pogojih se namesto čiste mize lahko uporabijo tudi lesene sterilne škatle. Sterilna škatla ima preprosto strukturo in jo je enostavno premikati. Na sprednji strani škatle sta dve odprtini, ki ju med delovanjem zapirajo vrata na potisni pogon. Med delovanjem lahko vanjo iztegnete roke. Zgornji del sprednje strani je opremljen s steklom za lažje notranje upravljanje. V škatli je ultravijolična svetilka, skozi majhna vratca ob strani pa je mogoče vstaviti pripomočke in bakterije.
Aseptične operativne tehnike trenutno ne igrajo ključne vloge le v mikrobioloških raziskavah in aplikacijah, temveč se pogosto uporabljajo tudi v številnih biotehnologijah. Na primer, transgena tehnologija, tehnologija monoklonskih protiteles itd.
Čas objave: 6. marec 2024